8M 尿素
20mM 咪唑
500mM NaCI
1mM 2-巯基乙醇
20mM Tris-HCI
复性缓冲溶液20mM 咪唑
500mM NaCI
1mM 2-巯基乙醇
20mM Tris-HCI
Tris洗脱缓冲溶液
500mM 咪唑
500mM NaCI
1mM 2-巯基乙醇
20mM Tris-HCI
实验方案：1、用低流速将样品结合在Ni柱上。
2、用10倍柱体积得尿素结合缓冲液洗柱。
3、以百分百得尿素结合缓冲溶液到百分百复性缓冲溶液得线性梯度经60min以0.5ml/min速度流过柱子。
4、以百分百得复性缓冲溶液到百分百Tris洗脱缓冲液得线性梯度流经柱子。
5、蛋白纯度检测：SDS-PAGE。
备注：1、尿素缓冲溶液得配制：称取尿素，加入2M 咪唑、1M Tris-HCI（pH 8.0）和水至90%终体积。加热容器（因变性剂会溶解吸热致冷），用45度水浴加热至室温并搅拌溶解。调节PH，加水至终体积。用前立即加入2-巯基乙醇。
2、含有盐酸胍得样品不能直接使用SDS-PAGE检测，因为SDS会使盐酸胍沉淀。含有尿素得样品不需要除掉尿素就可以直接用SDS-PAGE进行分析。
参考文献：《蛋白质组学中得蛋白质纯化手册》
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